大鼠胆固醇12α羟化酶（CYP881）elisa试剂盒用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被该指标抗体的微孔中，依次加入标本，标准品、HRP标记的检测抗体。经过洗涤后用底物TMB显色。TMB在过气化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 

大鼠胆固醇12α羟化酶（CYP881）elisa试剂盒试剂盒组成 

大鼠胆固醇12α羟化酶（CYP881）elisa试剂盒试剂的准备 

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 

洗板方法 

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。 

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 

自备物品 

1. 酶标仪（450nm） 

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 

3. 37℃恒温箱 

大鼠胆固醇12α羟化酶（CYP881）elisa试剂盒操作步骤 

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 

3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。 

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 

样品收集、处理及保存方法 

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 

结果判断 

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 

  上海森肽生物科技有限公司多年来一直致力于生物领域，已成为专业供应各类生物科研用品的公司,长期专注于生物领域,旗下产品种类众多。
   森肽生物秉承以产品质量为根本,以市场需求为向,以为客户创造价值为己任的精神,致力于发展的科研事业。为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。公司研发销售产品包括elisa试剂盒,生化试剂盒,PCR试剂盒，抗体。公司长期致力于elisa试剂盒、生化试剂盒的研发,为客户提供生化试剂盒、ELISA试剂盒、 技术服务等一系列实验代测服务。